前沿新品测评| DIA磷酸化产品优势大揭秘

从《Nature Methods》年度关注技术到癌症登月计划，DIA——全息扫描蛋白质组技术，突破了传统的数据采集模式，实现了无偏向性地采集样本中所有分子信息，在覆盖度、准确性、稳定性上实现了全面提升，是当下蛋白质组学研究领域的热门技术。

2020年哥本哈根大学健康与医学科学院蛋白研究中心Jesper V. Olsen团队发表在《Nature Communications》的“Rapid and site-specific deep phosphoproteome profiling by data-independent acquisition without the need for spectral libraries”一文中报道了突破性的DIA磷酸化蛋白质组学分析技术，将DIA从蛋白质分析扩大至蛋白质磷酸化分析，让翘首以盼的DIA磷酸化蛋白质组学技术由梦想变为现实，推动蛋白质磷酸化修饰分析跨入新篇章，实现了修饰组分析的全新突破！现中科新生命紧跟前沿技术，推出重磅新品----DIA磷酸化蛋白质组分析。

作为拥有数千例样本DIA蛋白质组检测与磷酸化蛋白质组学服务经验的公司，中科新生命基于已建立优化的DIA磷酸化蛋白质组学分析方法，为大家带来最新技术测评报告——揭秘DIA磷酸化蛋白质组学新产品三大优势。

高覆盖度：修饰位点15000+，鉴定水平提升超70%

以293T细胞作为测试对象，相比于传统DDA方法，DIA方法鉴定到的磷酸化肽段数量提升近一倍，突破15000+的鉴定能力。293T细胞提取并富集磷酸化肽段后，分别进行传统蛋白质组方法（DDA模式）、DIA方法（常规建库+DIA模式）以及DIA方法（深度建库+DIA模式）的样本检测，每个样本重复三次分析，并采用严格的过滤标准（protein & peptide 双FDR <0.01，位点 localization probability>0.75），考察单个样本、单针分析条件下的鉴定能力。

结果：DDA模式单针进样平均鉴定到8000+个磷酸化修饰位点；而DIA（常规建库+DIA模式）单针进样，平均鉴定到近15000个磷酸化修饰位点，鉴定水平提升超70%；DIA（深度建库+DIA模式）单针进样，平均鉴定到近18000个磷酸化修饰位点，鉴定提升超100%。

高准确性：定量准确性接近靶向检测技术

传统的数据采集方法（DDA）采用一级信号定量，干扰信号多，且由于扫描的重复性相对低，因此定量稳定性和准确性相对低。而DIA技术采用二级信号定量，信号干扰少，特异性高，且扫描重复性高、覆盖度高，因此定量稳定性和准确性更高。DIA定量的重复性、准确性、线性范围，可接近选择性、特异性的靶向定量技术MRM/PRM水平，两者的定量结果相关性（R2）高达0.95。

高稳定性：重现性提升近一倍

在重现性方面，DIA展现出了DDA模式下难以达到的优越稳定性，这对于大规模样本（如临床大队列样本、多药物浓度梯度处理样本等）的磷酸化蛋白质组研究具有巨大的应用价值。测试结果表明，DIA的三次样本重复所鉴定到的磷酸化肽段的重复性达80%，比DDA模式高出30%。

在定量稳定性上，DIA模式三次重复的CV值（中位数）仅5.8%，远优于传统模式13%；相关性分析中，DIA模式下的样本间相关性（R2）超过0.98。

总结

基于DIA全息扫描的模式，DIA磷酸化蛋白质组学展现出优越的 “高覆盖度”、“高准确性”、“高稳定性”特点，对于药靶筛选、激酶分析、 植物激素调控、神经疾病等磷酸化修饰研究均可实现深度、全面的信号通路覆盖，无需担忧实验重复性；尤其是对临床大队列样本的分子分型分析，稳定性有保障。