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一级序列测定

——即质谱法全序列分析的技术服务

蛋白质的氨基酸序列分析,包括N/C端氨基酸和全序列氨基酸序列分析。经典的氨基酸序列分析方法主要是使用化学方法进行解析(如Edman法),这里要介绍的是使用质谱法对氨基酸全序列进行分析。APT为客户提供两种质谱方案,分别是MALDI-TOF/TOF法和LTQ-Velos法。其中MALDI-TOF/TOF方法擅长对多肽类样品进行全序列分析(包括含有复杂修饰的多肽);LTQ-Velos方法较适合对蛋白质类样品的N/C端进行氨基酸序列分析。不少多肽类的药物分子中含有大量的非标准氨基酸、各种修饰和环形结构等等,APT为客户提供的质谱法全序列分析是现有科技能力下的最有效的序列解析方法。

“当遇到非标准氨基酸时,经典的化学方法(Edman)法就无能为力了。”

肽类药物的质谱法结构确认

随着生物科技的不断进步,多肽药物在新药研发中正占据越来越大的比重,而多肽分子结构的复杂性又要求对多肽药物必须进行全面表征,以满足新药报批、工艺改进和专利保护的要求。目前多肽药物的研发和表征还面临很多挑战,尤其是在重组多肽的序列确证、不同批次间产品的比较和质量控制等方面。

技术指标

质谱法全序列分析的供试品,大多数情况下是多肽类样品。原因是对于全序列分析而言,分子量不宜太大(尽管现在也有一些Top-down的质谱方法进行全序列分析,但是目前APT并不提供这类服务工作)。多肽类样品无论在MALDI-TOF/TOF还是LC-MS/MS中进行序列分析,分子量的范围一般情况下都在800-4000Da之间。分子量太小,由于碎片中的序列信息不足难以分析;分子量太大,由于质谱仪器本身的碎裂能量限制,也不能得到良好的碎片信息对氨基酸序列进行分析。

案例分析

下图显示的是一个多肽类药物的全序列碎片图谱,通过人工和算法比对,可以从图谱中得到多肽分子的序列信息。

质谱法全序列分析案例图谱

Q&A

1)   质谱方法对多肽类药物的复杂修饰、环形结构进行全序列解析工作。

使用质谱方法对多肽药物分子的全序列进行分析的基本原理为:多肽分子的分子量一般在800-4000Da,在这个范围内质谱仪能够有效地分析多肽分子的分子量,并将其破碎后成为MS2。通过记录供试品母离子及其碎片离子信息,再与其理论序列比对,就可确定该序列中的氨基酸组成及排列方式。


   
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