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HPLC质量肽谱图

——即质谱法质量肽谱的分析技术服务

质谱法质量肽谱是利用MALDI-TOF质谱仪将用特异性酶水解蛋白质后的肽片段进行分子质量测定。

质谱法质量肽谱分析是蛋白质一级结构研究中极为重要的手段之一,不但可以比较重组与天然蛋白质结果之间的同一性,确认基因工程上游和下游处理过程中是否发生差错、重组产物中是否存在后转译化学修饰及未预期氨基酸的变异等,而且不同批次产品的肽谱比较可验证工艺过程的稳定性。因此,肽谱分析在基因工程产品质控中尤为重要。


质谱法质量肽谱分析是肽图检查法(药典要求)的有效补充

技术指标

●  样品要求:

目标蛋白质浓度:> 1μg/μl

目标蛋白质总量: > 10μg

目标蛋白质纯度: > 90%

●  4800 MALDI-TOF/TOF技术参数:

AB SCIEX公司的4800 plus MALDI-TOF/TOF质谱仪具有极高的分辨率和灵敏度。在对实际样品的分析中分辨率可以达到18000,灵敏度达到ng级;一级质谱范围:800-4000m/z,每张图谱累加500个Laser Shots。

质谱法质量肽谱的谱图

案例分析

   样品信息:XXXXXXXXX受体 - 抗体融合蛋白

   样品批号:XXXXXXXXX

   对不同批次的重组XXXXXXXXX受体 - 抗体融合蛋白进行质量肽谱测试。结果发现批次间平行性较好,且可以通过一级质谱peaklist进行MASCOT检索蛋白质样品理论序列数据库,获得样品覆盖率信息,进一步确证批间平行性。

Q&A

1)    质谱法质量肽谱和HPLC肽图检查法之间的关系。

HPLC肽图检查法是基于色谱的肽图检查法,而质谱法质量肽谱是基于质谱的肽图检查法。质谱法突出的优点为可进行混合物分析,在一次测定中可以给出混合物中所有物质准确的分子量,它与酶解或化学降解结合后是确认基因工程药物与天然组分一级结构一致性的好方法,具有快速、准确、结果直观的优点,是对HPLC肽图检查法强有力的补充。

由于质谱法质量肽谱测定时上样微量化,且样品与基质混合不均一,使得蛋白质样品的酶解肽段不能完全被检测出来,从而遗漏部分样品信息。而HPLC质量肽图法,由于前端色谱柱的分离作用,可以检测到更多低丰度的肽段信息,从而得到更加全面的样品信息。

通过电喷雾离子化质谱(ESI/MS)进行肽图测定检查,既可以得到相应的色谱图谱,也可以得到各色谱峰的细节信息,且可以得到相应的肽段分子量,通过检索样品理论序列可进一步确认各色谱峰肽段对应理论序列,可同时进行定性和定量,并对样品的翻译后修饰进行鉴别,可以为蛋白类药物的质控提供更好的检测参数和结构信息确认。

   
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