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蛋白质胶条/混合液鉴定

产品定义

    利用LC-ESI-MS/MS蛋白鉴定技术对胶条样本(即SDS-PAGE样本)、IP、co-IP、Pull-down等纯化溶液等中等复杂样本进行蛋白鉴定。

 

                         

                            SDS-PAGE样本                                                      Co-IP实验质谱检测

技术原理

    电喷雾(ESI)技术是将待测分子溶解在溶剂中通过HPLC分离,以液相方式通过毛细管达到喷雾口,在喷雾口高压电场作用下形成带电荷的微滴,随着微滴中的挥发性溶剂蒸发,微滴表面的电荷体密度随半径减少而增加,达到某一临界点时,样品以离子化的方式从液滴表面蒸发,进入质量分析器。

    Ⅰ 电喷雾离子化方式容易形成多电荷离子,因此在较小的M/Z范围内可检测到大分子质量的分子;

    Ⅱ 采用液相方式进样,一般与液相色谱(LC)联用,可以对复杂样品进行质谱分析,根据样品在色谱中不同的保留时间对其进行分离后鉴定,大大提高了分析的效率和精确度。

电喷雾(ESI)工作原理示意图

实验流程

使用仪器

           Thermo Scientific LTQ-Velos       Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

    适合中度复杂的蛋白质样品,如相互作用的蛋白质条带;

    高准确性  高灵敏度。

应用领域

    蛋白质或多肽鉴定

样品需求

样品

样品要求

SDS-PAGE条带

考染、银染(质谱兼容)条带清晰可见

蛋白质溶液

蛋白质总量>5μg,浓度>0.1μg/μl;

缓冲液不含去污剂NP40Triton   X-100

参考案例

[1]       Tamura K, Fukao Y, et al. Identification and characterization of nuclear pore complex components in Arabidopsis thaliana. Plant Cell. 2010; 22(12) 4084-97.

[2]       Wang ZQ, Wang L, et al. Proteomic analysis of Trichinella spiralis proteins in intestinal epithelial cells after culture with their larvae by shotgun LC-MS/MS approach. J Proteomics. 2012; 75(8): 2375-83.


   
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