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iTRAQ

产品定义

iTRAQ(isobaric tags for relative and absolute quantitation)技术是由美国应用生物系统公司ABI研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用4种或8种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较4种或8种不同样品中蛋白质的相对含量。

技术原理

iTRAQ试剂由三部分组成:报告基团、质量平衡基团和肽反应标记试剂基团,形成4种或8种相对分子质量均等量(145或305)的异位标签。


iTRAQ试剂组成图(以4-plex为例)

iTRAQ试剂用于标记酶解后的肽段。在质谱图中,任何一种iTRAQ试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中,报告基团、质量平衡基团和多肽反应基团之间的键断裂,质量平衡基团丢失,带不同同位素标签的同一多肽产生不同的报告离子,根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。


实验流程

注释:“样品及实验预判”包括定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析,对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。

使用仪器

             Thermo Scientific Q Exactive                AB Sciex TripleTOFTM 5600

技术优势

可同时对2-8种不同条件样品进行蛋白质差异分析。

适合广泛样品类型:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白等。

与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,iTRAQ质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。

应用领域

疾病标志物筛选                              作用机制研究

植物抗逆研究                                 药物作用靶点研究

特殊功能蛋白质筛选

样品要求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >300μg

细胞样品

细胞量>107

组织样品

动物、微生物组织湿重>10mg;植物鲜嫩组织>100mg

体液样品

血液体积>500μl

技术参考案例

[1]       Yang QS, Wu JH, et al. Quantitative proteomic analysis reveals that antioxidation mechanisms contribute to cold tolerance in plantain (Musa paradisiacal L.; ABB Group) seedlings. Mol Cell Proteomics. 2012; 11(12): 1853-69.

[2]       Leivonen SK, Rokka A, et al. Identification of miR-193b targets in breast cancer cell and systems biological analysis of their functional impact. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(7).

[3]       Xu C, Gao X, et al. The basal level ethylene response is important to the wall and endomembrane structure in the hypocotyl cells of etiolated arabidopsis seedlings. Mol Cell Proteomics. 2012; 54(7): 434-55.


   
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