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TMT

TMT™ ——Amine-reactive Thermo Scientific Tandem Mass Tag™ 

产品定义

TMT™(Tandem Mass Tag)技术是由美国Thermo Scientific公司研发的一种多肽体外标记技术。该技术采用2种、6种或10种同位素的标签,通过特异性标记多肽的氨基基团,然后进行串联质谱分析,可同时比较2组、6组或10组不同样品中蛋白质的相对含量。

技术原理

TMT™标签由三部分组成:分子量报告子、分子量标准化部分和反应基团,形成2种、6种或10种相对分子质量均等量的异位标签。


TMT™标签结构示意图

TMT™试剂通过反应基团能够高效地标记酶解后的肽段。在一级质谱图中,分子量标准化部分使任何一种TMT™试剂标记的不同样本中的同一肽段表现为相同的质荷比。在串联质谱中,可剪切臂能够优先断裂以便释放分子量报告子。每个报告子都有各自独特的分子量,并且能够在MS/MS分析中反应出所标记的多肽的样品丰度,根据报告离子的信号强度值可获得样品间相同肽段的定量信息,再经过软件处理得到蛋白质的定量信息。


TMT™实验流程图(以6标为例)

实验流程

注释:“样品及实验预判”包括蛋白质定量、SDS-PAGE测试、酶解和质谱分析,对样品质量及样品之间的平行性进行初步判断。

使用仪器

Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

■ 可同时对2-10种不同条件样品进行蛋白质差异分析;

■ 适合广泛样品类型:胞浆蛋白、膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白、分泌蛋白等;

■ 与凝胶分离的蛋白质定量技术相比,TMT™质谱定量技术可检测到更多类型的蛋白质分子,如低丰度蛋白质、强酸(碱)性蛋白质、<10KD或>100KD的蛋白质分子。

应用领域

■ 疾病标志物筛选

■ 分子机制研究

■ 植物抗逆研究

■ 药物作用靶点研究

■ 特殊功能蛋白质筛选

样品要求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >300μg

细胞样品

细胞量 >107

组织样品

动物、微生物组织湿重   >10mg;植物鲜嫩组织 >100mg

体液样品

血液体积 >500μl

技术参考案例

[1]   Thompson, A, et al. Tandem mass tags: a novel quantification strategy for comparative analysis of complex protein mixtures by MS/MS. Anal Chem. 2003; 75(8):1895-1904.

[2]   Dayon, L, et al. Relative quantification of proteins in human cerebrospinal fluids by MS/MS using 6-plex isobaric tags. Anal Chem. 2008; 80(8):2921-31.

[3]   Zhuang, G, et al. Phosphoproteomic analysis implicates the mTORC2-FoxO1 axis in VEGF signaling and feedback activation of receptor tyrosine kinases. Sci Signal. 2013; 16; 6(271):ra25.


   
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