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SILAC

产品定义

细胞培养氨基酸稳定同位素标记(Stable Isotope Labeling with Amino acids in Cell culture, SILAC),这种方法首先是由2002年丹麦Mann实验室的Ong等对AACT技术作了进一步改进而获得,并首次应用于定量蛋白质组学研究,为全面、系统地定性和定量分析复杂哺乳动物细胞蛋白质组提供了有效的解决方案。

技术原理

分别用天然同位素(轻型)或稳定同位素(重型)标记的必需氨基酸取代细胞培养基中相应氨基酸,细胞经5-6代倍增周期后,稳定同位素标记的氨基酸完全掺入到细胞新合成的蛋白质中替代了原有氨基酸。不同标记细胞的裂解蛋白质按细胞数或蛋白量等比例混合,经分离、纯化后进行质谱鉴定。

实验流程

注释:“SDS-PAGE分级”处也可选择酶解后在肽段水平进行分级。

使用仪器

Thermo Scientific Q Exactive

技术优势

细胞培养时掺入标记,减小实验误差,定量更准确。

应用领域

疾病标志物筛选              作用机制研究

药物作用靶点研究           特殊功能蛋白质筛选

样品要求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度>1μg/μl,蛋白质总量 >300μg

细胞样品

细胞量>107

技术参考案例

[1]       Kim JY, Welsh EA, et al. Dissection of TBK1 signaling via phosphoproteomics in lung cancer cells. Proc Natl Acad Sci U S A. 2013; 110(30): 12414-9.

[2]       Sobczyk GJ, Wang J, et al. SILAC-based proteomic quantification of chemoattractant-induced cytoskeleton dynamics on a second to minute timescale. Nature Commun. 2014; 5: 3319.

[3]       Ravikumar V, Shi L, et al. Quantitative phosphoproteome analysis of Bacillus subtilis reveals novel substrates of the kinase PrkC and phosphatase PrpC. Mol Cell Proteomics. 2014 Jan 5.


   
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