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2D双向凝胶电泳

产品定义

双向凝胶电泳是将不同种类的蛋白质按照等电点和分子量差异进行高分辨率分离的分析方法。成功的二维电泳可以将2000到3000种蛋白质进行分离,是唯一能同时将上千种蛋白质同时分离和展示的方法,在蛋白质组学中发挥重要的作用。


技术原理

先将蛋白质根据其等电点在pH梯度胶内进行等电聚焦,然后按照它们的相对分子量大小进行SDS聚丙烯酰胺凝胶(SDS-PAGE)第二次电泳分离。电泳后对凝胶进行染色,并用相关软件对图像进行分析处理。

实验流程

注释:“样品及实验预判”包括蛋白质定量、至少一次双向凝胶电泳实验,对样品质量判断及实验条件优化。

使用仪器

第一向IEF:Ettan IPGphor Isoelectric Focusing System(GE Amersham);

第二向SDS-PAGE:Hofer SE 600(GE Amersham);

扫描仪:UMax Powerlook 2110XL (GE Amersham)。

技术优势

经典蛋白质组学方法,蛋白质差异变化直观可见;

经济实惠。

应用领域

疾病标志物筛选          作用机制研究               植物抗逆研究

药物作用靶点研究       特殊功能蛋白质筛选

样品要求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度>4μg/μl,蛋白质总量>5mg

细胞样品

细胞量>108

组织样品

湿重>300mg

体液样品

血液体积>1ml

技术参考案例

[1]    Haneda T, Sugimoto M, et al. Comparative proteomic analysis of Salmonella enteric serovar Typhimurium ppGpp-deficient mutant to identify a novel virulence protein required for intracellular survival in macrophages. BMC Microbiol. 2010; 10: 324.

[2]    Wang X, Bian Y, et al. A comprehensive differential proteomic study of nitrate deprivation in Arabidopsis reveals complex regulatory networks of plant nitrogen responses. J Proteome Res. 2012; 11(4): 2301-15.

[3]    Gromova I, Gromov P, et al. Proteomic profiling of triple-negative breast carcinomas in combination with a three-tier orthogonal technology approach identifies Mage-A4 as potential therapeutic target in estrogen receptor negative breast cancer. Mol Cell Proteomics. 2013; 12(2): 381-94.


   
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