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DIGE荧光差异双向凝胶电泳

产品定义

荧光差异双向凝胶电泳(DIGE)是一种在2D电泳之前标记蛋白质样品的方法,可以对样品间蛋白质丰度进行精确分析。

技术原理

Ettan DIGE荧光差异蛋白质表达分析系统在传统双向凝胶电泳技术的基础上,结合多重荧光分析的方法,在同一块胶上共同分离多个分别由不同荧光标记(Cy2,Cy3,Cy5)的样品,并且第一次引入内标的概念,极大地提高结果的准确性、可靠性和重复性。在DIGE实验中,每个蛋白质点都有它自己的内标,并且软件全自动根据每个蛋白质点的内标对其表达量进行校准,保证所检测到的蛋白质丰度变化是真实的。

Ⅰ 荧光染料采用分子量和等电点相互匹配的三种荧光标记分子Cy2、Cy3、Cy5,其特殊设计的NHS脂活性基团通过氨基酸桥连接作用于蛋白质的赖氨酸上,使检测灵敏度达到125pg。

Ⅱ Cy2标记所有样品的等量混合样作为内标,理论上包含了需要分析样品的所有蛋白质点,存在于每一块需要被分析的胶中。采用专业软件对蛋白质点作出更加可观的定量变化分析。

实验流程

                                     

                                                                                              注释:“样品及实验预判”包括蛋白质定量、至少一次

                                                                                              双向凝胶电泳实验,对样品质量判断及实验条件优化。

技术优势

相对应传统的双向电泳技术,检测灵敏度更高,大大节约样品;

采用内标对数据进行归一化处理,消除胶与胶之间差异造成的误差,准确度高。

用领域

疾病标志物筛选                    作用机制研究

植物抗逆研究                       药物作用靶点研究

特殊功能蛋白质筛选

样品需求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度 > 4μg/μl,蛋白子总量 > 5mg

细胞样品

细胞量 > 108

组织样品

湿重 > 300mg

体液样品

血液体积 > 1ml

技术参考案例

[1]    Samuel MA, Tang W, et al. Proteomic analysis of Brassica stigmatic proteins following the self-incompatibility reaction reveals a role for microtubule dynamics during pollen responses. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(12).

[2]    De la Cuesta F, Alvarez-Llamas, et al. A proteomic focus on the alterations occurring at the human atherosclerotic coronary intima. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(4).

[3]    Hong Y, Peng J, et al. Proteomic analysis of Schistosoma japonicum Schistosomulum proteins that are differentially expressed among hosts differing in their susceptibility to the infection. Mol Cell Proteomics. 2011; 10(8).


   
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