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定量磷酸化蛋白质组分析

产品定义

蛋白质发生磷酸化是重要的翻译后修饰,它与信号传导、细胞周期、生长发育以及癌症机理等诸多生物学问题有密切关系。研究蛋白质磷酸化对阐明蛋白质功能具有重要意义。

将磷酸化肽段TiO2富集技术和iTRAQ技术相结合,实现对磷酸化蛋白质组学的定量研究。

技术原理

在磷酸化肽段富集前先进行iTRAQ标记,然后通过TiO2富集方法获得高纯度的磷酸化肽段,最后结合高分辨率质谱完成对样品的定量分析。(可详见iTRAQ和蛋白质修饰位点定性分析部分的技术原理介绍)


实验流程

使用仪器

Thermo Scientific Q Exactive                              AB Sciex TripleTOFTM 5600

技术优势

◆ iTRAQ方法分为4-plex和8-plex两种,可配合科研课题灵活应用;

◆ 在磷酸化富集前进行iTRAQ标记,避免TiO2富集的不平行对定量结果的干扰,提高定量磷酸化蛋白质组分析的精确度。

应用领域

◆ 疾病机理研究

◆ 个性化医疗

◆ 农业品种改良

样品要求

样品类型

样品要求(/组样品)

蛋白质提取物

浓度 >1μg/μl,蛋白质总量 >600μg

细胞样品

细胞量>107

组织样品

动物、微生物组织湿重>20mg;植物鲜嫩组织>200mg

体液样品

血液体积>1ml

技术参考案例

[1]     Nguyen TH, Brechenmacher L, et al. Quantitative phosphoproteomic analysis of soybean root hairs inoculated with Bradyrhizobium japonicum. Mol Cell Proteomics. 2012; 11(11): 1140-55.

[2]     Lee DH, Goodarzi AA, et al. Phosphoproteomic analysis reveals that PP4 dephosphorylates KAP-1 impacting the DNA damage response. EMBO J. 2012; 31(10): 2403-15.

[3]     Tsigankov P, Gherardini PF, et al. Regulation dynamics of Leishmania differentiation: deconvoluting signals and identifying phosphorylation trends. Mol Cell Proteomics. 2014 Apr 16.


   
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