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干货分享 | 重组胶原蛋白中工艺相关杂质的质量控制

2024-03-28
中科新生命
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重组胶原蛋白:采用重组DNA技术,对编码所需人胶原蛋白质的基因进行遗传操作和(或)修饰,经适当的宿主细胞表达和制备的胶原蛋白或类似胶原蛋白的多肽;分为重组人胶原蛋白、重组人源化胶原蛋白以及重组类胶原蛋白。重组胶原蛋白具有良好的生物相容性和生物活性、低免疫原性等优势,是医疗器械以及医美行业的“明星”分子。
 
近2年来,国家药监局分别颁布了YY/T-1849-2022《重组胶原蛋白》和YY/T-1888-2023《重组人源化胶原蛋白》两个行业标准,规范重组胶原蛋白的质量控制、检测指标以及检测方法等。其中工艺相关杂质部分的检测方法和标准汇总如表1:
 
 
 
表1. 工艺相关杂质汇总
 
 
上海中科新生命生物科技有限公司参与了YY/T 1888-2023《重组人源化胶原蛋白》医疗器械行业标准的制定工作,具有丰富的工艺相关杂质分析经验,下面对工艺杂质中自建方法的检项进行案例介绍。
 
残余抗生素含量
胶原蛋白表达工艺中常使用的抗生素是氨苄西林和卡那霉素,针对这两种抗生素我们公司自建了基于LC-MS/MS的检测方法,方法定量限为10ng/mL,满足行业标准中抗生素残留的限度要求。
 
氨苄西林
定量限: 10ng/mL
 
 
 
图1. 氨苄西林定量限图谱
 
 
线性:氨苄西林在10-400ng/mL范围内线性拟合R2:0.9972
 
 
 
图2.氨苄西林线性图谱
 

 

卡那霉素
定量限: 10ng/mL
 
 
 
图3. 卡那霉素定量限图谱
 
 
 
线性: 卡那霉素在10-500ng/mL范围内线性拟合R2:0.9968
 
 
 
图4. 卡那霉素线性图谱
 

 

添加剂
主要介绍发酵培养过程中添加的消泡剂以及诱导剂。
 
消泡剂
消泡剂主要作用是抑制或消除泡沫,工艺中常用二甲基硅油和聚醚类消泡剂两类。这两类分子都属于非离子型表面活性剂,是不同聚合程度的混合物,无紫外吸收,我们推出了基于CAD检测器的解决方案。
 
二甲基硅油
 
检测限:5μg/mL
 
 
 
图5. 二甲基硅油检测限图谱
 
 
 
线性:二甲基硅油在10-200μg/mL范围内线性拟合R2:0.9973
 
 
 
图6. 二甲基硅油线性图谱
 
 
 
聚醚消泡剂
 
定量限:5μg/mL
 
 
 
图7. 聚醚消泡剂定量限图谱
 
线性:聚醚消泡剂在5-100ppm范围内线性拟合R2:0.9994
 
 
 
图8. 聚醚消泡剂线性图谱
 
 
 
诱导剂
异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)是大肠杆菌表达系统常用的诱导剂,我们推出基于基于LC-MS/MS的检测方法,方法定量限为10ng/mL,用于IPTG残留的质量控制。
定量限:10ng/mL
 
 
 
图9. IPTG定量限图谱
 
 
 
线性:IPTG在10-500ng/mL范围内线性拟合R2:0.9977
 
 
 
图10. IPTG线性图谱