干货分享|分析型超速离心AUC分析表征
分析型超速离心
分析型超速离心(Analytical Ultracentrifugation,AUC)是表征生物大分子特性、研究生物分子理化性质的主要技术手段之一,用于分析样品异质性、聚集体的形成以及分子间相互作用等。分析型超速离心机由主机、光学系统、转头以及样本池组件等构成,可以实时监测样品沉降过程中溶质浓度随时间和距离的改变,从而计算得到分子特性。
分析型超速离心技术的分析方法主要有沉降速率(Sedimentation Velocity)和沉降平衡(Sedimentation Equilibrium)两种。在沉降速率实验中,在离心力作用下,溶质分子向样品池底部移动,通过记录的数据来测定溶质分子运动的速率。运动速率用沉降系数表示,它取决于分子量、分子形状或构象。对于不同组分的样品,根据不同的沉降系数检测每个组分。扫描得到沉降数据后,通过后续软件分析可得到样品表征结果,本实验使用SEDFIT软件进行数据处理。
操作过程
供试品处理
将供试品(如小核酸样本、病毒载体样本等)用对应的缓冲液稀释,400μL体积/每份供试品备用。对照的溶剂buffer与样品buffer一致;无与供试品吸收峰相互干扰的物质;注意粘度变化。供试品需要纯化,并且在检测条件下稳定。
装载供试品
样品池out面朝向自己,右孔加样品上样量380μL,左孔加buffer加样量400μL,注意不要加反。
实验仪器
分析型超速离心机
仪器参数设置(以小核酸样品为例)
转头:AN 60 Ti rotor
转速:60000 rpm
检测方式:UV/VIS 260nm
检测温度:20℃
检测频率:120 second
样品池:铝制中心件
实验操作过程
接通电源,打开离心机盖,装配好样品池;样品池与counterbalance配平后放置于转子中;安装离心转头及单光器后关上离心机盖;选中编辑好的离心程序;抽真空,并开始运行程序,待温度平衡至20℃后,再在预定转速下进行离心。程序结束后,去真空。打开离心机盖,取出转头。取出样品池
数据处理和结果
(以小核酸样本为例)
用SEDFIT软件进行数据分析,选择模型和参数拟合结果,以下为例举软件处理参数对应内容。