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修饰蛋白定量分析 • 完整N-糖肽蛋白质组

 

· 产品定义

糖基化是指蛋白质在酶的作用下将糖链连接到蛋白质特定氨基酸形成糖苷键的过程。细胞内超过 50% 的蛋白质都有一个或多个糖链。连接于天冬酰胺(Asn)残基上的N-糖基化在真核生物中广为存在,也是研究最为深入的一种糖基化形式。N-糖基化具有重要的生物学功能,在细胞核内调节转录和信号传导;在细胞内可作为营养感受器;在分泌途径中,内质网启动的糖基化类型参与蛋白质折叠、稳定和运输;在细胞表面,调节蛋白稳定性或活性、提供细胞粘附的接触点,调节受体的配体特异性或亲和力、调节受体二聚化和信号传导;在细胞-细胞粘附和通讯中起作用;介导细菌宿主相互作用,如初始附着和入侵、定植。

为满足研究者除N-糖基化位点定性定量外,对糖型组成分析的需求,特此开发完整N糖肽蛋白质组。完整N糖肽蛋白质组,首先对蛋白质进行酶解,随后ZIC-HILIC富集完整N糖肽,然后通过LC-MS/MS进行检测。最后,通过与蛋白质数据库及糖型数据库进行比对,实现大规模N-糖基化位点的定性定量分析及糖型组成的定性分析。

 

· 技术路线

完整N糖肽技术路线

 

· 技术优势

1. 关注度持续攀升的糖基化修饰,研究潜力巨大

2. N-糖基化位点定性定量+糖型定性分析,一举两得

3. 采用ZIC-HILIC亲水富集法,无偏向、高特异性、高通量

4. 采用pGlyco 3.0软件,糖链、多肽和糖肽三维度质控

 

· 数据分析

标准数据分析内容

完整N-糖肽定性分析

定量结果统计分析;糖肽定性统计;motif分析;TOP20糖链分布统计;糖型定性统计;

差异糖肽蛋白功能分析

GO功能分析;KEGG通路分析;蛋白互作分析;

 

· 推荐应用领域

1. 生物标志物

2. 信号转导研究

3. 基因表达调控研究

4. 肿瘤发展机制研究

 

· 送样建议

 样品类型(限人、小鼠、大鼠和拟南芥)

推荐送样量

动物组织类

常规动物组织(脑、心、肝、脾、肺、肾、肌肉、皮肤等)

50mg

植物组织类

柔软组织(木本植物的叶、花等,草本科植物,藻类,蕨类植物,大型真菌等)

1g

细胞样品

悬浮/贴壁培养细胞

1×10^7

体液类

血清/血浆

200μL

唾液

2mL

泪液

1mL

 

· 应用案例

       1. Protein Nglycosylation aberrations and glycoproteomic network alterations in osteoarthritis and osteoarthritis with type 2 diabetes. 2022. Scientific Reports (IF 4.6 )

骨关节炎和伴2型糖尿病骨关节炎中的蛋白N糖基化畸变和糖蛋白组网络改变

       2. Quantitative proteomics analysis reveals important roles of N-glycosylation on ER quality control system for development and pathogenesis in Magnaporthe oryzae. 2020. PLoS Pathogens. (IF 6.7)

N糖基化蛋白质组修饰揭示N糖基化修饰参与稻瘟菌致病过程的分子机制