iCIEF技术检测：毛细管等电聚焦电泳分析新突破
2023-08-30
中科新生命
2166毛细管电泳泛指以高压电场为驱动力，以弹性石英毛细管为分离通道，依据样品中各组分之间淌度和分配行为上的差异而实现分离的电泳分离分析方法。该技术可分析的多肽、蛋白质等，比HPLC分析高效、快速、微量。那么你对多肽蛋白质全柱成像毛细管等电聚焦电泳（iCIEF）分析了解多少呢？
设备
毛细管等电聚焦仪（Maurice C.）：
检测范围宽：2.85-10.45PI
检测时间短：10-15分钟
样品盘4℃、10℃、15℃精确控温
可放置96孔板或48进样瓶，高通量自动运行
全柱像扫描，利于观测样品聚焦过程。
可用于cIEF检测，其有2种检测方式同时采集，UV280吸收和荧光检测280激发，320-450发射。
▲Maurice C.
基本原理
在毛细管两端加上直流电压，管内的载体两性电解质可以形成一定范围的 pH 梯度，蛋白质依据其所带电荷向阳极或阴极移动，直到净电荷为 0 的某个 pH 值(即等电点 pI)时停止，最终蛋白质聚焦成很窄的区段，从而达到分离的目的。
检测样品类型
蛋白质（单抗）
多肽
融合蛋白
样品需求
对方法成熟的样品不需要开发（胰岛素、单抗类、特立帕肽等）
没有检测过的类型需要进行开发（尿素、两性电解质、聚焦时间、上样量等）
需要提供样品的缓冲液成分、分子量、理论等电点等，适用于波长280nm附近有良好吸收的样本
样品送样量要求
浓度需大于1mg/ml，总量大于150μg
样品示例
▲供试品1
▲供试品2
优势
应用范围广，多肽到抗体类样品均可检测，分离效率高、PI重现性高；
本公司所有的PI marker 范围涵盖3.38-10.45；
已有成熟方法：胰岛素（除地特胰岛素和德谷胰岛素）、单抗类、特立帕肽等。
