UPLC质量肽图分析：生物医药质控的重要手段
2023-09-28
中科新生命
1103UPLC质量肽图分析是蛋白质一级结构研究中极为重要的手段之一，不但可以比较重组与天然蛋白质结果之间的同一性，确认基因工程上游和下游处理过程中是否发生差错、重组产物中是否存在后转译化学修饰及未预期氨基酸的变异等，而且不同批次产品的肽谱比较可验证工艺过程的稳定性。因此，肽谱分析在生物医药产品质控中尤为重要。
实验仪器
高分辨质谱仪：XevoG2-XS QTof (Waters公司)
超高效液相色谱：UPLC (Acquity UPLCⅠ-Class) (Waters公司)
检测流程
供试品经酶解后进入UPLC，根据肽段不同保留时间进行分离，洗脱下来的肽段进入质谱进行检测。根据质谱检测器采集的质谱结果和数据分析软件，可以确认UPLC质量肽图中紫外吸收峰所对应的肽段。
肽图分析原理及流程：
结果展示：
BPI图谱
BPI色谱图通常显示保留时间在x轴上，以及相对丰度（通常是信号强度）在y轴上。峰的位置和高度可用于识别分子的保留时间和相对丰度。此图主要反映样品的色谱分离度、肽段信号强度（可以结合上样量判断样品酶解情况）、样品蛋白构成复杂程度等。
肽段通过色谱柱分离后，通常采用紫外（UV）检测器在波长200～230nm范围内检测，最常用的检测波长是214nm。结合质谱检测可对各色谱峰对应的肽段进行定性，确定特征肽段并在肽图谱中进行归属。
UV图谱标注图
肽段信息列表
通过肽段信息列表可以直观的查看检测到的肽段的保留时间、酶切位点信息、及肽段序列、分子量等信息。
常见问题解答
问
UPLC质量肽图，同一肽段出现不同的洗脱时间？
答
出现不同的洗脱时间，可能由于肽段有异构化现象，分子量一样，但是极性不同，所以会出现洗脱时间有一定的差异。另外有些可能是由于肽段的丰度较高，洗脱时间过长，出现一定的拖尾现象。
问
UPLC质量肽图，蛋白内切酶的自切峰会不会出现在肽谱图上？
答
蛋白内切酶的使用量是蛋白质的1/50，在质谱上基本不会对蛋白质的肽段峰产生影响。
问
UPLC质量肽图的实验重复性如何？能否做到样品和对照的比较？
答
重复性较好，能通过和标准对照品一同实验来比较一致性，主要是判断出峰数量和出峰时间的一致性。最好是样品和对照品一同酶解，一同进行液相检测。如果中间隔较长时间，且不是同一批酶解，可能会出现细小的差别。主要是酶解较难控制。
