如果组织先冰冻处理,组织内部会产生冰晶损伤组织形态,可能切片找不到满意的截面,还是建议各位老师取到组织后先包埋再冰冻。
一张好的HE染色切片染色后细胞质呈粉红色,细胞核呈蓝紫色,结缔组织呈粉红色,肌肉呈深红色,血管呈粉红色,细胞着色清晰,颜色艳丽,细胞形态清晰,界线清楚。冰冻切片与石蜡切片的实验目的不同,使用的染色液和染色方法也不同,冰冻切片需要尽可能保证RNA的完整,所以在染色过程中不会使用分色液、二甲苯、乙醇等,而石蜡样本则无需考虑这一点。
空间转录组项目仅收集组织样本的少量切片进行RNA抽提质检,并非整块组织的总RNA,不同切片位置对应的组织在RNA完整性上可能存在差异,尤其是切片的组织部位有坏死或大部分为结缔组织,可能会影响抽提结果。
不建议1个包埋盒放多个组织样本,最好将每个组织块单独包埋,防止多个组织在1个OCT包埋块中同时切片,无法满足所有样本预期的目标区域,如果老师对目标截面要求不高,一起包埋的单个组织截面大小不超过2.5mmx2.5mm,因为10x捕获框的大小为6.5mmx6.6mm,需要确保一起包埋组织的大小不超过捕获框的大小才能有效捕获组织切片的信息。
切面取决于客户的研究目的,切片需要涵盖研究关注的区域,特别是像脑组织等具有复杂结构的组织或有特殊要求的。建议客户到公司共同完成切片的过程,提高切片的成功率,也减少中间沟通的时间成本;像肿瘤组织,最好能包含癌、癌旁和癌远端组织,一般在可以选择的范围内选择最大截面进行切片。
可以的,我们也做过皮肤组织的研究,相对而言,真皮层的表达水平可能会较低,而表皮层的表达水平会较高。我们已经开展过相关项目。
已经有相关案例报道,例如Chao, Yiming, et al. Signal Transduction and Targeted Therapy 8.1 (2023): 230。我们已经做过一些关于类器官的研究案例,这些组织只是比较小而已,其他方面没有太大的差别。
Stereo-cite是检测空间转录组和空间蛋白两个组学的产品,目前正在测试阶段,可以预计2024年出相关的商业试剂盒,请老师和APT销售咨询进度
目前相应的产品正在测试中,石蜡样本的主要问题是RNA已经断裂。因此,基于polyA捕获的技术无法捕获石蜡包埋的RNA,只能使用随机扩增策略。随机扩增的产品正在研发中,请关注2024年可能会推出相应的产品。
组织解离时扩散是一个普遍现象。在冰冻切片方法中,这个问题是存在的。主要问题是在解离过程中,扩散几乎是无法避免的。如果没有充分透化,RNA可能无法释放出来;但透化过度,RNA可能会扩散到相邻的组织区域。因此,几乎每个组织或样本都有不同的透化时间,以找到相对平衡的点,使RNA得到充分消化,扩散较少。