工艺相关杂质 • 宿主蛋白残留(HCP)检测

·背景介绍

     重组生物制品主要是通过宿主细胞（例如细菌、酵母或哺乳动物、昆虫或植物细胞系）进行表达和纯化得到。在重组蛋白生产过程中，宿主细胞还共同产生与正常细胞功能有关的蛋白，经过细胞凋亡、死亡、裂解，其他非必需蛋白也可以释放到细胞培养基中。因此，宿主蛋白（HCP）蛋白残留是生物制品中非常关键的工艺相关杂质，可能影响产品的安全性和功效。 美国药典规定HCP残留量1-100 ng/mg；中国药典各论中规定，CHO细胞HCP残留量不高于0.05% 。

     酶联免疫法（ELISA）是药典规定的 HCP定量方式，但这个技术本身也具有局限性。如：ELISA试剂盒中抗体覆盖率只能达到50%-80%左右，不能覆盖所有的HCP种类；ELISA方法只能对总量进行测定，无法得到每种HCP的种类和含量信息。因此，国内外专家建议采用质谱法对宿主蛋白（HCP）进行准确的检测和定量分析，与ELISA方法形成正交对照，对HCP残留种类和含量进行严格控制。

·检测依据

  - 中国药典2020年版四部通则（3412）大肠埃希菌菌体蛋白质残留量测定法

·原理

  - 采用酶联免疫吸附法测定大肠埃希菌表达系统生产的重组制品中菌体蛋白质残留量

·检测范围

  - 蛋白质样品，包括但不限于中间产物、原液、成品和稳定性样品。

·主要设备

  - 酶标仪：Spectra Max M4   

·交付内容

  - HCP含量检测结果

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