工艺相关杂质 • HCD残留检测

·检测依据

  - 中国药典2020年版四部通则(3407)外源性DNA残留量测定法

·原理

  - 荧光染色法：应用双链DNA荧光染料与双链DNA特异结合形成复合物，在波长480nm激发下产生超强荧光信号，可用荧光酶标仪在波长520nm处进行检测，在一定的DNA浓度范围内以及在该荧光染料过量的情况下，荧光强度与DNA浓度成正比，根据供试品的荧光强度，计算供试品中的DNA残留量。

  - 定量PCR法：通过荧光标记的特异性探针或荧光染料掺入而检测PCR 产物量，通过连续监测反应体系中荧光数值的变化，可即时反映特异性扩增产物量的变化。在反应过程中所释放的荧光强度达到预设的阈值时，体系的PCR循环数(Ct值）与该体系所含的起始DNA模板量的对数值呈线性关系。采用已知浓度的DNA标准品，依据以上关系，构建标准曲线，对特定模板进行定量分析，测定供试品中的外源DNA残留量                                                   

·检测范围

  - 化药或蛋白质样品，包括但不限于中间产物、原液、成品和稳定性样品。

·主要设备

  - 全自动核酸提取纯化仪：P961001                                                                                  

  - 荧光定量PCR仪：CFX96TM Real-Time System                                                 

  - 酶标仪：Spectra Max M4                                                                                                   

·交付内容

  - HCD含量检测结果